肉的宰后嫩化基本归因于肌原玻纤机构设计的摧毁，肌原玻纤机构设计是由内源性蛋清酶淀粉水解现象酶化学光降解肌原玻纤和血細胞骨架蛋清酶有的。与数十几年来长期是加关注焦聚的钙蛋清酶酶与众不同，胱天蛋清酶酶（caspases）这几天拥有感意向语句题。胱天蛋清酶酶在血細胞凋亡的制定环节起着至关很重要的意义，这其中caspase-3在生前蛋清酶淀粉水解现象中的意义是多的方面面和多样化的，以至于还可以进一步明确一个脚印科学调查分析。S-亚硝基化还可以通过调接钙减少、消耗的能量分解、蛋清酶质化学光降解和血細胞凋亡来调接肉质地，具有嫩度和持水业务能力。刚开始科学调查分析显示S-亚硝基化还可以上涨依耐线粒体的caspase-3级联现象，这已经是腿部肌肉血細胞凋亡和牛肉片品质质量影响的问题。caspase-3的科学调查分析关键点是其与血細胞凋亡的原因，其实，非常少有科学调查分析探析S-亚硝基化调接caspase-3的体系。

2024年9月由扬州农林二本大学张万刚教受团队合作在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱怪物为该研究提供了亚硝基化绘制组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

汉语大标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2025年直接影响指数公式：5.7

撤稿的时间：2024年9月

朋友厂家：南京农业大学

分析用料：蛋白

拜谱具备技能：亚硝基化修饰组学

技术工艺路线地图：

一、探究没想到

01.Caspase-3亲水性

当下尚不看不清楚NO对caspase-3的抑制性的功效能不归因于NO介导的S-亚硝基化，不一盐浓度系数的GSNO看作外源性NO供应商，以诱惑caspase-3的身体外S-亚硝基化。数据说明，与没能GSNO的组较之，100、200和400μM GSNO组的caspase-3化学活化正相关下降（图1），与事先有关资料统一。GSNO加工处理下降caspase-3化学活化的暗藏病因仍亟待相一致。

图1 有所差异浓度值的GSNO净化处理对caspase-3几丁质酶的干扰

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化的程度

深入分析Caspase-3的亚硝基化能力，以系统阐述GSNO对Caspase-3的症状性。经GSNO处理后，检验到caspase-3淀粉酶S-亚硝基化承载力增强（图2）。此类结果显示表面，外源性GSNO培养出来可成功失败引诱caspase-3的休外S-亚硝基化。让人觉得诧异的是，在找不到GSNO的存在的相较比较组中检验到个细小的S-亚硝基化带，这表面caspase-3可能进行内源性的S-亚硝基化。于此，本深入分析中caspase-3的S-亚硝基化能力较高，而caspase-3的可溶性削减，这与开始之前的深入分析不符。所以，caspase-3的特男人S-亚硝基化掩盖位点尚不很明白，还要有进那步的生命的进化。

图2 GSNO治理对caspase-3S-亚硝基化情况的影晌

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。浅蓝色标示图片的字段说S-亚硝基化肽，橙红色标示图片的C说S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3化学降解结淀粉酶

结淀粉酶看做1种至关非常重要的肿瘤组织细胞骨架淀粉酶，在稳定肌肿瘤组织细胞型式的型式完正性和内缩性层面起着至关非常重要效应，实验S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶生物生物降解的灵敏性含有至关非常重要意义上。与Std（未用胱天淀粉酶酶-3和GSNO孵育的初期肌人造合成纤维淀粉酶）组相对，0 μM GSNO组（肌原人造合成纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完正结淀粉酶含碳量显著性削减，建议caspase-3对结淀粉酶含有风险的淀粉酶电离作用。在GSNO孵育后，完正结淀粉酶的含碳量显眼加剧（P < 0.05）。除此以外，当GSNO渗透压变高时，完正结淀粉酶的含碳量持续不断上涨（P < 0.05）（图5）。某些找到证实，SNO绘制的caspase-3以关卡依赖关系的习惯压制结淀粉酶的生物生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3生物降解结球蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙蛋清-T

肌钙血清质-T (TnT)是原肌球血清质转换提供肩部肌肉抽缩的细细的的须要肌原氯纶血清质。TnT的光生物光光降解塑料症状是在线检测工具到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化必备条件下，caspase-3对TnT的光生物光光降解塑料状况如图甲如下6如下，与Std组（因为就没有含caspase-3和GSNO的肌原氯纶）相比较，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写强势延长，说明caspase-3体验了TnT的光生物光光降解塑料，不仅如此，caspase-3与GSNO的孵育引致30 kDa TnT下滑。在100和200 μM GSNO组范围内就没有在线检测工具到强烈的一定的差异(P > 0.05)，而当GSNO的浓度值达成400 μM 时，该场面描写强势极大减少(P < 0.05)。等感觉说明了SNO装饰的caspase-3对TnT光生物光光降解塑料的减缓使用。结血清质和TnT是caspase-3的皮肤敏感底物，而GSNO治理 减轻caspase-3的亲水性酶可能引致肌原氯纶血清质光生物光光降解塑料的程度减轻。以上所说，NO引发的S-亚硝基化行采用装饰半胱氨酸残基来转换caspase-3的亲水性酶，因此进第一步决定其对结血清质和TnT的血清质溶解意识，故而决定羊肉好品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙蛋白酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本的研究主要是研究S-亚硝基化对caspase-3体现的的应响和随着对羊肉肌原纤维板板身体外吸附的的应响。蛋清酶S-亚硝基化需要体现caspase-3的半胱氨酸残基，故而促使caspase-3活力性有效降低，进三步遏制了其对羊肉肌原纤维板板蛋清酶的蛋清酶电离水平。

三、拜谱总结ppt

实验通过了酶活检侧法，亚硝基化呈现组学概述，WB等检侧途径，发觉球球核球蛋白S-亚硝基化需要呈现caspase-3的半胱氨酸残基，这以至于了caspase-3灵活性的下降，齐头并进一点仰制了其对羊肉肌原黏胶纤维球球核球蛋白的球球核球蛋白油脂水解性能。本实验为讲解球球核球膳食纤维亚硝基化对吃起来的调空工作机制能提供新一个新的第一视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的球营养素组学、表达球营养素组学、细胞代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸品类成品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total氧化物恢复备份、游离子巯基，欢迎大家咨询！

参考资料医学文献：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663